Titulación | Tipo | Curso | Semestre |
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2502445 Veterinaria | OT | 5 | 0 |
Dado que el contenido de la asignatura es eminentemente práctico, no hay ningún requisito indispensable. Sin embargo se recomienda haber cursado la asignatura de Biología Celular (o equivalente) en cursos anteriores.
También es recomendable el conocimiento de la lengua inglesa, para poder profundizar en la bibliografía suministrada.
CONTEXTUALIZACIÓN:
La asignatura de Cultivos Celulares en Investigación Biomédica se imparte en el 2º semestre del 5º curso de la titulación de Veterinaria en la Facultad de Veterinaria. Esta es una asignatura con un cierto grado de especialización, en la que se pretende
que el alumno adquiera nociones básicas para poder iniciarse en las metodologías utilizadas en la manipulación y el cultivo de células eucariotas de mamíferos. Por eso es una asignatura con un componente práctico importante.
Este bloque de lecciones pretende aportar al estudiante de Veterinaria conocimientos sobre las técnicas básicas de cultivo de células animales, tanto en cuanto a sus fundamentos teóricos, como en cuanto a la parte práctica de las mismas.
También se incluye el aprendizaje de técnicas para el seguimiento o la caracterización de las células en cultivo, como la microscopía de contraste de fases y de fluorescencia y las técnicas para la inmunodetección fluorescente de proteínas. Se trata de técnicas
muy útiles en la en investigación y en industrias derivadas de la misma, como la farmacéutica, en la que se utilizan, por ejemplo, la caracterización celular o la detección de efectos citotóxicos y mutagénicos de diversos compuestos (medicamentos, aditivos , etc.).
OBJETIVOS:
1) Conocer el equipamiento y material básico de un laboratorio de Cultivos Celulares.
2) Conocer las metodologías y protocolos básicos utilizados en un laboratorio de Cultivos Celulares.
PROGRAMA DE TEORÍA
1. Introducción a los cultivos celulares: Repaso básico de biología celular: orgánulos y funciones de la célula. Historia de los cultivos celulares. Aplicaciones de los cultivos celulares. Ventajas / Inconvenientes de los cultivos celulares.
2. Equipamiento y asepsia: Sala o laboratorio de cultivos, equipamiento de laboratorio, equipamiento de cultivos, cabinas de flujo, cabinas de seguridad biológica, técnica aséptica.
3. Establecimiento de un cultivo celular: Tipo de cultivos: monocapa, suspensión, 3D. Aislamiento de tejidos, cultivo de explantes, cultivo primario, separación de células: centrifugación, citometría, matrices, magnetismo.
Requerimientos celulares: medio, componentes del medio, control del pH, crecimiento celular, subcultivos, recuento celular, control de la viabilidad, proliferación celular, principios de criopreservación: medios de congelación, crioprotectores y tasa de enfriamiento .
Establecimiento de una línea celular.
4. Líneas celulares mortales e inmortales: cultivo primario, transformación, inmortalización, células madre: tipos, cultivo, diferenciación, aplicaciones. Hibridomas: células inmortales y síntesis de anticuerpos.
5. Transfección: transfección, transducción y transformación. Transfección vírica. Transfecciones químicas y físicas. Ventajas e inconvenientes.
6. Caracterización celular: morfología celular, tipode microscopía, microscopía fluorescente. Caracterización del DNA: hibridación in situ fluorescente (DNA y RNA), aplicaciones, extracción de ADN, PCR, secuenciación.
Caracterización proteica: inmunodetección fluorescente de marcadores proteicos, western blot.
PROGRAMA DE PRÁCTICAS
1. Mantenimiento y subcultivo de líneas celulares. Control del crecimiento de las células en cultivo in vitro. Control de la morfología.
2. Fijación y marcaje de células por inmunofluorescencia. Caracterización celulares mediante anticuerpos.
3. Ensayos de citotoxicidad: Control de la viabilidad y la proliferación celular y ensayo de toxicidad: apoptosis y daño en el DNA.
4. Congelación y descongelación de líneas celulares.
5. Discusión de los resultados.
Descripción La asignatura de Cultivos Celulares en Investigación Biomédica consta de clases teóricas y de clases prácticas en el laboratorio.
Las clases teóricas se realizarán utilizando material audiovisual preparado por el profesor, y que los alumnos tendrán a su disposición en el Campus Virtual de la UAB antes de las sesiones.
Las actividades prácticas tendrán dos partes y están diseñadas para que el alumno aprenda a utilizar el instrumental de laboratorio y se familiarice con los protocolos básicos de cultivos celulares, así como para que complemente la formación teórica.
1- Prácticas en el laboratorio: Los alumnos realizarán un total de 4 sesiones de prácticas de 4h cada una. Estas sesiones se realizarán durante la misma semana. En estas prácticas se cultivarán, subcultivaran, congelarán y descongelarán células, se caracterizarán las mismas y se evaluará la acción y los efectos de componentes citotóxicos. Los alumnos trabajarán en grupos de 2 y, al final de cada día de prácticas, deberán rellenar una hoja de laboratorio con los resultados obtenidos ese día. Posteriormente deberán presentar un informe de prácticas que recopile y discuta brevemente los resultados obtenidos durante la semana de prácticas.
2- Presentación y discusión de un artículo relacionado con los cultivos celulares en la investigación biomédica: Los alumnos elegirán uno de los artículos relacionados con las técnicas de cultivos celulares (ofrecido por el profesor) y deberán presentarlo brevemente (4-5minutos) en clase, contextualizándolo dentro de los contenidos de la asignatura. Los alumnos trabajarán en grupos de 2 ó 3 personas para preparar su presentación. Durante las presentaciones, los alumnos se harán preguntas y se evaluarán entre ellos (30% nota de esta parte) y el profesor los evaluará a todos (70% nota de esta parte).
Título | Horas | ECTS | Resultados de aprendizaje |
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Tipo: Dirigidas | |||
Clases de prácticas | 16 | 0,64 | 2, 3 |
Clases de teoría | 10 | 0,4 | 3 |
Tipo: Autónomas | |||
Elaboración y presentación del informe de prácticas | 3 | 0,12 | 1, 2 |
Estudio individual | 42,5 | 1,7 | 1, 3 |
Presentación de un artículo científico | 2 | 0,08 | 1, 2 |
Título | Peso | Horas | ECTS | Resultados de aprendizaje |
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Evaluación práctica | 50% | 0,5 | 0,02 | 1, 2, 3 |
Evaluación teórica | 50% | 1 | 0,04 | 1, 3 |
BIBLIOGRAFÍA:
R.I. Freshney. Culture of Animal Cells: A manual of basic technique 6th Edition. John Wiley & Sons, 2010.
WEBS:
http://bcs.wiley.com/he-bcs/Books?action=index&bcsId=5959&itemId=0470528125
https://www.youtube.com/user/gibcocellculture/videos?view=0&sort=p&flow=grid